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不銹鋼發(fā)酵罐的滅菌操作是保障發(fā)酵過程無菌環(huán)境的核心步驟,直接關(guān)系到發(fā)酵產(chǎn)物的純度和成功率,操作時要重點關(guān)注壓力、溫度、時間、死角清理、安全防護這幾個關(guān)鍵要點,具體注意事項如下:
先清理罐內(nèi)殘留物料和污垢,尤其是罐底、攪拌槳、擋板、人孔密封圈等容易藏污納垢的 “死角”,用清水或?qū)S们逑磩_洗干凈
檢查所有密封部件(人孔蓋、管道法蘭、閥門密封墊)是否完好,有破損的及時更換,防止滅菌時蒸汽泄漏,影響滅菌壓力和溫度。
確認安全附件(壓力表、安全閥、溫度傳感器)正常工作,壓力表要提前校驗,安全閥確保在設定壓力下能自動泄壓,避免超壓風險。
關(guān)閉與發(fā)酵罐連接的不必要管道閥門,只保留滅菌用的蒸汽管道和冷凝水排放管道暢通,防止蒸汽串入其他設備。
不銹鋼發(fā)酵罐常用飽和蒸汽滅菌,滅菌溫度一般控制在 121℃,對應的蒸汽壓力約 0.1MPa(表壓),這個參數(shù)能有效殺滅包括芽孢在內(nèi)的絕大多數(shù)雜菌。
滅菌時間要足夠,通常保持 20-30 分鐘(從罐內(nèi)溫度穩(wěn)定達到 121℃開始計時),如果罐內(nèi)物料體積大、導熱性差,可適當延長時間,但不要盲目延長,避免高溫破壞罐內(nèi)的不銹鋼材質(zhì)或密封件。
滅菌時要保證蒸汽均勻分布,開啟攪拌裝置低速運轉(zhuǎn)(避免高速攪拌導致泡沫過多),讓蒸汽能接觸到罐內(nèi)所有部位,防止局部溫度不足。
注意排放冷凝水,滅菌過程中蒸汽會凝結(jié)成水,要及時打開冷凝水排放閥,避免罐內(nèi)積水導致實際溫度低于設定值,同時防止冷凝水浸泡電氣元件(如溫度傳感器)。
滅菌時嚴禁打開人孔蓋或隨意開啟閥門,罐內(nèi)處于高溫高壓狀態(tài),貿(mào)然開蓋會導致蒸汽噴出燙傷人員。
密切監(jiān)控壓力和溫度變化,一旦出現(xiàn)壓力驟升(超過 0.15MPa),立即檢查安全閥是否失靈,必要時手動打開泄壓閥緩慢泄壓,嚴禁快速泄壓,防止罐內(nèi)壓力急劇下降導致液體暴沸,沖擊罐體。
操作人員要穿戴好防護用品(耐高溫手套、防護眼鏡),避免接觸高溫罐體和蒸汽管道。
滅菌完成后,先關(guān)閉蒸汽閥門,讓罐內(nèi)壓力自然下降至常壓,溫度降至室溫或工藝要求溫度后,再進行后續(xù)操作(如接種),不能帶壓開蓋。
若滅菌后暫不使用,要保持罐內(nèi)干燥,或通入無菌空氣維持正壓,防止外界雜菌進入。
記錄滅菌的關(guān)鍵參數(shù)(溫度、壓力、時間),存檔備查,方便后續(xù)追溯發(fā)酵過程的無菌狀態(tài)。
若發(fā)酵罐配備在線滅菌(SIP)系統(tǒng),要按照系統(tǒng)操作規(guī)程分步執(zhí)行,確保管道、閥門、過濾器等附屬設備同步滅菌,不能遺漏。
對于不耐高溫的部件(如某些傳感器探頭),要提前拆卸或用無菌保護膜包裹,避免高溫損壞。





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